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標(biāo)簽:半胱氨酸(cysteine Cys)含量測(cè)定試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
半胱氨酸(cysteine, Cys)含量測(cè)定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63221 |
蛋白質(zhì)含有三種含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中,Cys是唯一一種含有巰基的含硫氨基酸,從甲硫氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái),并且可與胱氨酸互相轉(zhuǎn)化。Cys參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成,經(jīng)常是蛋白質(zhì)活性中心的組成部分,還可以為其它生理生化反應(yīng)提供巰基。此外,Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面,在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性,并且補(bǔ)充巰基,以維持皮膚的正常代謝,調(diào)節(jié)表皮最下層的色素細(xì)胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過(guò)敏性皮膚等作用。
測(cè)定原理:
Cys還原磷鎢酸生成鎢藍(lán),在600nm處有吸收峰;通過(guò)600nm吸光度,計(jì)算Cys含量。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、85%磷酸和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。用前1天,向試劑三中加5 mL蒸餾水充分溶解,再加85%磷酸1.25mL,混勻后蓋緊(防止水分散失)沸水浴2h;冷卻后加20 mL蒸餾水,4℃可保存2周。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1瓶,臨用前加10 mL蒸餾水,充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,4℃避光保存。用不完的試劑4℃可保存3天。
半胱氨酸提取:
1、液體樣品中半胱氨酸提取:取0.1mL液體樣品,加試劑一0.9mL,充分混勻,8000g
4℃離心10min,取上清液,待測(cè)。
2、組織中半胱氨酸提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10 min,取上清液待測(cè)。
3、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到600 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管:取1mL玻璃比色皿,加入100 μL蒸餾水,500μL試劑二,500μL試劑三,混勻后室溫靜置15 min,于600nm處測(cè)定吸光值,記為A空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:取1mL玻璃比色皿,加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)液,500μL試劑二,500μL試劑三,混勻后室溫靜置15 min,于600nm處測(cè)定吸光值,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管:取1mL玻璃比色皿,加入100 μL上清液,500μL試劑二,500μL試劑三,混勻后室溫靜置15 min,于600nm處測(cè)定吸光值,記為A測(cè)定管。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
計(jì)算公式:
1. 按液體樣品的體積計(jì)算:
半胱氨酸含量(μmol/mL)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×(V樣總÷V樣)=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算:
半胱氨酸含量(μmol/g鮮重)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×(V樣總÷V樣)÷W=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷W
3. 按照蛋白濃度計(jì)算:
半胱氨酸含量(μmol /mg prot)= [C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]÷(V樣×Cpr)=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷Cpr
4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:
氨基酸含量(μmol /104 cell)=[C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)] ×(V樣總÷V樣×細(xì)胞數(shù)量)=1×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量
C標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品濃度,1μmol/mL;V標(biāo)準(zhǔn)品:反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積,0.1 mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣品提取液體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL。W:樣品質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL。
注意事項(xiàng):
最低檢出限為100μmol/L。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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