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標(biāo)簽:胰蛋白酶(Trypsin)試劑盒
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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
胰蛋白酶(Trypsin)試劑盒 | 分光法 | 50T/48S | CS-01S63225 |
胰蛋白酶選擇性水解變性蛋白質(zhì)中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構(gòu)成的肽鏈,是一種重要的消化酶。此外,胰蛋白酶還廣泛應(yīng)用于膿胸、血胸、外科炎癥、潰瘍、創(chuàng)傷性損傷等所產(chǎn)生的局部水腫、血腫及膿腫等的輔助治療。
測定原理:
胰蛋白酶催化水解TAME的酯鍵,釋放出的游離羧基與反應(yīng)體系中的氫氧化鈉發(fā)生中和反應(yīng),導(dǎo)致溶液的pH值降低,以苯酚紅為指示劑,測定溶液在555nm處吸收值的變化,可以快速測得胰蛋白酶活性數(shù)據(jù)。胰蛋白酶在一定范圍內(nèi)與555nm處吸收值的降低呈良好的線性關(guān)系。
自備儀器和用品:
紫外可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體60 mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體4 mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1.組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)冰浴勻漿,10000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。
測定步驟:
1. 分光光度計預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到555 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 工作液的配制:臨用前根據(jù)用量按照試劑一(V):試劑二(V):蒸餾水(V):試劑三(V)=1 mL:1 mL:5.4 mL:0.4 mL的比例充分混合。(注意:現(xiàn)用現(xiàn)配,用多少配多少,在空瓶中配制,試劑盒中帶有4個空瓶)
3. 吸取25μL樣本,加入975 μL工作液,混勻后立即測定,記錄555nm下1min時的吸光值A1和2min時的吸光值A2。計算△A=A1-A2
注意:如果△A小于0.005,可將反應(yīng)時間延長到5min。如果△A大于0.5,體系迅速變色,可將樣本用提取液稀釋后測定(建議稀釋10倍),計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
胰蛋白酶活性計算公式:
使用石英比色皿測定的計算公式如下
(1)按蛋白濃度計算
活性單位定義:室溫下每毫克蛋白質(zhì)每分鐘催化555nm處吸光值減少1為1個酶活單位。
胰蛋白酶(U/mg prot)= △A ×V反總 ÷(Cpr×V1)÷T
=40×△A ÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義:室溫每克組織每分鐘催化555nm處吸光值減少1為1個酶活單位。
胰蛋白酶(U/g 鮮重)= △A×V反總÷(W×V1÷V2)÷T
=40×△A ÷W
Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定;W:組織質(zhì)量(g);V1:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積(mL),25 μL=0.025 mL;V2:粗酶液總體積(mL),1 mL;V反總:反應(yīng)總體積,1 mL;T:反應(yīng)時間(min),1 min。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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