13585831301
021-59541103 021-60443211
3004967995
13585831301021-59541103 021-604432113004967995
在線訂購 免費訂購熱線：021-59541103 021-60443211
聯(lián)系人:高小姐
電話:021-59541103 021-60443211
手機:13585831301
Q Q： 3004967995
Email:3004967995@qq.com
詳細地址：上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661
| 產品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 中性蛋白酶（Neutral protease, NP）活性測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01Ｓ63224 |
NP在一定的溫度和中性pH條件下，催化水解蛋白質。由于其安全無毒、水解能力強、作用范圍廣等特點，中性蛋白酶常用于食品、飼料、化妝品和營養(yǎng)保健品生產。
測定原理：
中性條件下，NP催化酪蛋白水解產生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在680nm有特征吸收峰。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1mL玻璃比色皿、1.5 mL EP管和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體90mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加10 mL蒸餾水溶解。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入20 mL試劑一，沸水浴中磁力攪拌溶解。（可在燒杯上蓋一層保鮮膜，注意觀察，避免水分全部蒸發(fā)，一般加熱15-30分鐘，該試劑為過飽和試劑，充分混勻后仍出現(xiàn)顆粒物不溶物不影響使用）。
試劑四：粉劑×1瓶， 4℃保存。臨用前加50 mL蒸餾水溶解。
試劑五：液體10mL×1瓶，4℃保存。
標準品：液體1mL×1支，0.25 μ mol/mL標準酪氨酸溶液，4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1.組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即粗酶液。
2.血清或培養(yǎng)液：直接測定。
3.細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
測定操作：
1.分光光度計預熱30min，調節(jié)波長到680 nm，蒸餾水調零。
2.試劑二、試劑三和試劑四置于30℃水浴保溫30min。
3. 對照管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL試劑二，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入200μL試劑三，混勻后8000g， 4℃離心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A對照管。
4. 測定管：取一支EP管，加入100μL粗酶液，200μL試劑三，混勻后置于30℃水浴保溫10min；加入200μL試劑二，混勻后8000g， 4℃離心10min；取200μL上清液，加入新的EP管，再加入1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A測定管。（注意與空白管不同，先加試劑三，后加試劑二）
5. 空白管：取EP管，加入200μL蒸餾水，1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A空白管。
6. 標準管：取EP管，加入200μL標準品，1000μL試劑四，200μL試劑五，混勻后置于30℃水浴保溫20min，于680nm測定光吸收，記為A標準管。
注意：空白管和標準管只需要測定一次。
計算公式：
1. 按照樣本蛋白濃度計算
NP活性單位定義：30℃每毫克蛋白每分鐘水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
NP活性（nmol/min /mg prot）= C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷(Cpr×V1)÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷Cpr
2．按照樣本質量計算
NP活性單位定義：30℃每克樣品每分鐘催化水解產生1 nmol酪氨酸為1個酶活單位。
NP活性（nmol/min /g鮮重）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷（W×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷W
3. 按照液體體積計算
NP活性單位定義：30℃每毫升樣品每分鐘催化水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
NP活性（nmol/min/mL）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷V1÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）
4.按照細胞數(shù)量計算
NP活性單位定義：30℃每104個細胞每分鐘催化水解產生1nmol酪氨酸為1個酶活單位。
NP活性（nmol/min /104 cell）=C標準品×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）×V反總÷（細胞數(shù)量×V1÷V2）÷T= 125×（A測定管－A對照管）÷（A標準管－A空白管）÷細胞數(shù)量
C標準品：0.25 μ mol/mL標準酪氨酸溶液；V反總：酶促反應總體積，0.5mL；Cpr：粗酶液蛋白質濃度（mg/mL）；V1：加入反應體系中粗酶液體積（mL），0.1 mL；V2：提取液總體積（mL），1mL；T：催化反應時間（min），10min；W：樣品質量（g）。
注意事項：
臨用前配制的試劑配制好后4℃保存，并且3天內使用完畢。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司
留言注意事項：
1.遵守中華人民共和國有關法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。
2.請您真實的反映產品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產品有任何疑問,也可以留言咨詢。
3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個人或團體的具有廣告性質的信息或類似言論。
| 您感興趣的產品* | |
| 您的單位* | |
| 聯(lián)系人* | |
| 聯(lián)系電話* | |
| 詳細地址* | |
| 常用郵箱* | |
| 請輸入您對我們的意見或建議* | |
| 驗證碼* | |
 |
產品訂購說明:
1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發(fā)貨。
3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。
4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。
5、如需代為檢測，標本對環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專人取樣（限省內客戶）。
6、代測免收代測費，一周出結果。
7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內為您補發(fā) 損壞產品。
8、如因單位財務制度原因，可申請先發(fā)貨，報賬后付款（此條款僅限醫(yī)院、學校信譽良好客戶）。
普票匯款信息
賬 戶 名：上海生物
開 戶 行：中國銀行山東省分行營業(yè)部
賬 號：2169 2341 6278
關于莼試
產品訂購
新手指南
幫助中心