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產(chǎn)品名稱	檢測方法	規(guī)格	貨號
還原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）試劑盒	分光光度法	50管/48樣	CS-01Ｓ63248

注意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

GSH是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì)，在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運輸?shù)戎芯哂兄匾饔?。還原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要動態(tài)指標(biāo)。因此，測定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。

商品介紹：

測定原理：

DTNB與GSH反應(yīng)生成復(fù)合物，在412nm處有特征吸收峰；其吸光度與GSH含量成正比。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

粗酶液提取：

1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3.血清等液體：直接測定。

GSH測定操作：

1. 分光光度計預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）水浴中保溫30min。

3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL蒸餾水，700μL試劑二，200μL試劑三，混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1。

4. 測定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL上清液，700μL試劑二，200μL試劑三，混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2。

注意：空白管只需要測定一次。

GSH含量計算公式：

GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線公式：y=1.5 x（x為GSH濃度，μ mol /mL；y為吸光值）

GSH計算：

（1）按蛋白濃度計算

GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷（V樣×Cpr ）=0.667×(A2－A1) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

GSH（μ mol/g鮮重）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2－A1) ÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計算

GSH（μ mol /104 cell）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)=0.667×(A2－A1) ÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計算

GSH（μ mol/ mL）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2－A1)

V樣總：上清液總體積，1 mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；

注意事項：

1.試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定。

2.最低檢出限為0.01mmol/L。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

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