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產(chǎn)品名稱(chēng)	檢測(cè)方法	規(guī)格	貨號(hào)
谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferase，GST）試劑盒	分光光度法	50管/48樣	CS-01Ｓ63246

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結(jié)合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因?yàn)镚ST具有GSH-Px活性，亦稱(chēng)為non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應(yīng)減少GSH含量，但是不增加GSSG

商品介紹：

測(cè)定原理：

GST催化GSH與CDNB結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)為340nm；通過(guò)測(cè)定340nm波長(zhǎng)處吸光度上升速率，即可計(jì)算出GST活性。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體45mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5 mL蒸餾水溶解。

粗酶液提?。?/span>

1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。

2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3. 血清等液體：直接測(cè)定。

測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，用蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）保溫。

3. 測(cè)定管：取1mL石英比色皿，加入100μL上清液，900μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。

GST活性計(jì)算公式：

(1). 按蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST（nmol/min/mg prot）=(A2－A1))÷ε÷d×109×V反總÷(Cpr×V樣)÷T

=230×((A2-A1) ÷Cpr

(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：在25℃或者37℃中，每克樣品每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST（nmol/min/g鮮重）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=230×(A2-A1) ÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義：在25℃或者37℃中，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST（nmol/min/104 cell）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=230×(A2-A1) ÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

活性單位定義：在25℃或者37℃中，每毫升液體每分鐘催化1nmol/L CDNB與GSH結(jié)合為1個(gè)酶活單位。

GST（nmol/min/mL）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反總÷V樣÷T

= 230×(A2-A1)

ε：產(chǎn)物摩爾消光系數(shù)，9.6×103 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；106：1mol=1×106μmol；V反總：反應(yīng)體系總體積，1100μL=0.0011 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議選用本公司生產(chǎn)的BCA蛋白質(zhì)濃度測(cè)定試劑盒；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間（min），5min。

注意事項(xiàng)：

1. 樣品處理等過(guò)程均需要在冰上進(jìn)行，且須在當(dāng)日測(cè)定酶活力；

2. 細(xì)胞中GST活性測(cè)定時(shí)，細(xì)胞數(shù)目須在300萬(wàn)-500萬(wàn)之間，細(xì)胞中GST的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞；

3. 本法測(cè)定GST活性的線(xiàn)性范圍可達(dá)76 μmol/min /L，測(cè)定前先用1～2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如5min內(nèi)反應(yīng)不成線(xiàn)性，須對(duì)樣品用蒸餾水稀釋?zhuān)?jì)算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；

4. 測(cè)定反映的溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響，請(qǐng)控制在25℃或者37℃（哺乳動(dòng)物）。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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