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標(biāo)簽:肌酸激酶(Creatine Kinase CK)測定試劑盒
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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
肌酸激酶(Creatine Kinase, CK)測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63239 |
CK(EC
測定原理
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑1瓶,4℃避光保存,使用前加15mL蒸餾水溶解。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
工作液:臨用前根據(jù)用量將試劑一和試劑二以1:1混合。使用前37℃溫育2min。
粗酶液提取
1.組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心15min,取上清,置冰上待測。
2.血清樣本:直接測定。
測定操作表
1. 紫外分光光度計預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2.在1 mL石英比色皿中加入200μL樣本和300μL蒸餾水,最后加入500μL工作液,立即混勻,37℃下測定初始吸光值A1與1min后的吸光值A2,ΔA=A2-A1。
CK活性計算公式
1、按組織蛋白含量計算
酶活定義:37℃,pH7.0時,每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個酶活單位。
CK活性(nmol/min / mg prot)=×V反總÷(V樣×Cpr)= 804×△A÷Cpr
2、按組織樣本質(zhì)量計算:
酶活定義:37℃,pH7.0時,每克樣品1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個酶活單位。
CK活性(nmol/min /g 鮮重)=×V反總÷(V樣÷V樣總×W)= 804×△A÷W
3. 按血清計算:
酶活定義:37℃,pH7.0時,每升血清1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個酶活單位。
CK活性(nmol/min /L)=×V反總÷V樣= 804×△A
:NADPH摩爾消光系數(shù),6220 L /mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,1mL;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.2mL;T,反應(yīng)時間,1min;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
注意事項
1. 配制好的工作液4℃穩(wěn)定7天,請配制后盡快使用。
2. 血清的CK不穩(wěn)定,采集樣本后盡快測定,4℃避光保存可穩(wěn)定24h。
3. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定,可選用BCA蛋白含量測定試劑盒進(jìn)行測定。
4. OD值大于0.5可用提取液適當(dāng)稀釋樣品,并在計算公式中相應(yīng)的改變稀釋倍數(shù)。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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產(chǎn)品訂購說明:
1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足,除對溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。
3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期,詳細(xì)情況請咨詢客服。
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