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產(chǎn)品名稱(chēng)	檢測(cè)方法	規(guī)格	貨號(hào)
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶（Granule-bound starch synthase，GBSS）試劑盒	分光光度法	50管/48樣	CS-01Ｓ63235

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

GBSS（EC 2.4.1.21）以束縛態(tài)存在于淀粉體中，催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng)，主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。

商品介紹：

測(cè)定原理

GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時(shí)生成ADP；進(jìn)一步通過(guò)反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH，其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比，通過(guò)340nm下測(cè)定NADPH的增加量，可以計(jì)算GBSS活性。

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液：液體60mL×2瓶，4℃保存；

試劑一：50mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入14mL試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入8mL試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入17mL試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

試劑五：液體×1支，-20℃保存；臨用前加入1mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入1mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

粗酶液制備

稱(chēng)取0.1~0.2g組織（建議稱(chēng)取約0.1g組織），加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在EP管中按順序加入下列試劑

混勻后立即340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意：試劑二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。

GBSS活性計(jì)算

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

GBSS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T×稀釋倍數(shù)

=529×ΔA÷Cpr

此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

GBSS活性（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（V樣÷V樣總×W）÷T×稀釋倍數(shù)

=529×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，7.8×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.15 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；稀釋倍數(shù)：1.9；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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