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標(biāo)簽:血磷濃度檢測(cè)試劑盒(UW5-1 50T/48S)
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產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
血磷濃度檢測(cè)試劑盒(UW5-1, 50T/48S) | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63270 |
血磷主要指血中的無(wú)機(jī)磷,以無(wú)機(jī)磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切,在以mg/dL表示時(shí),二者的乘積([Ca]×[P])為30~40。當(dāng)([Ca]×[P])>40,則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織;若([Ca]×[P])<35則妨礙骨的鈣化,甚至可使骨鹽溶解,影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對(duì)穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對(duì)平衡。上述平衡受到維生素D3、甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié)。
測(cè)定原理:
去除血清中有機(jī)磷后,無(wú)機(jī)磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸,被硫酸亞鐵還原后呈藍(lán)色,在620nm有光吸收;通過(guò)測(cè)定620 nm吸光度,計(jì)算血液中磷含量。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體62.5mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體3.1mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前配制,依次加入22 mL蒸餾水充分溶解,再加入試劑二,充分混合。
標(biāo)準(zhǔn)液:液體1mL×1支,0.02 m mol/L無(wú)機(jī)磷,4℃保存。
血磷濃度測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到620 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液,室溫解凍。
3. 血清預(yù)處理:吸取50 μL血清,加950μL試劑一,混勻后室溫8000rpm,離心10min,取上清液,待測(cè)。
4. 空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入250μL蒸餾水,250μL試劑一,500μL試劑三,混勻后靜置10min,于620 nm測(cè)定吸光度,記為A空白管。
5.標(biāo)準(zhǔn)管:取1mL玻璃比色皿,依次加入250μL標(biāo)準(zhǔn)液,250μL試劑一,500μL試劑三,混勻后靜置10min,于620 nm測(cè)定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
6. 測(cè)定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入250μL上清液,250μL試劑一,500μL試劑三,混勻后靜置10min,于620 nm測(cè)定吸光度,記為A測(cè)定管。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
血磷濃度計(jì)算:
血磷含量(m mol/dL)=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V樣總=0.04×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)液:0.02 mmol/L;樣品稀釋倍數(shù):(50 μL血清+950μL試劑一)÷50 μL血清=20;V樣總:100 mL=0.1 L。
注意事項(xiàng):
1.試劑三需臨用前配制,如未用完,4℃保存,最多可使用3天;
2.測(cè)定過(guò)程中,應(yīng)盡量避免溶血,因?yàn)榧t細(xì)胞中有機(jī)磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血清無(wú)機(jī)磷含量增高。
3.采血后宜盡早進(jìn)行血清磷測(cè)定,時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響血清磷含量。
4.最低檢出限為10μmol/L。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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