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產(chǎn)品名稱	檢測(cè)方法	規(guī)格	貨號(hào)
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP）試劑盒	分光光度法	50管/48樣	CS-01Ｓ63309

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

UDPG焦磷酸化酶是生物體糖原合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP-葡萄糖（UDPG）。

商品介紹：

測(cè)定原理

UGP可逆催化反應(yīng)生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉(zhuǎn)化為NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿。

試劑組成和配制

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體25mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加5mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑四：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑五：液體5mL×1瓶，4℃保存。

酶液提取

1.組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心10min，取上清置冰上待測(cè)。

2.細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置冰上待測(cè)。

3.液體：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作

1.分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2.取1mL石英比色皿，依次加入500μL試劑一，100μL試劑二，100μL試劑三，100μL試劑四，100μL試劑五，100μL粗酶液，充分混勻，記錄340nm處30s的吸光值A1和330s的吸光值A2，△A=A2-A1

計(jì)算公式

（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA÷（ε×d）×V反總×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA÷（ε×d）×V反總×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min /104 cell）= [ΔA÷（ε×d）×V反總×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T

=0.643×ΔA

（4）按照液體體積計(jì)算

酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADP定義為一個(gè)酶活力單位。

UGP（nmol/min/mL）＝[ΔA÷（ε×d）×V反總×109]÷V樣÷T=321.54×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g ；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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2、常用試劑備貨充足，除對(duì)溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。

3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細(xì)情況請(qǐng)咨詢客服。

4、訂貨時(shí)間為工作日每周一至周五16:00之前。

5、如需代為檢測(cè)，標(biāo)本對(duì)環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專人取樣（限省內(nèi)客戶）。

6、代測(cè)免收代測(cè)費(fèi)，一周出結(jié)果。

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