產(chǎn)品目錄

丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase，PC，EC 6.4.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、霉菌和酵母的線(xiàn)粒體中，催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，是糖異生過(guò)程的第一個(gè)限速酶，在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。

商品介紹：

測(cè)定原理：

PC催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，蘋(píng)果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋(píng)果酸和NAD+，在340nm下測(cè)定NADH氧化速率，即可反映PC活性。

需自備的儀器和用品：

分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體47 mL×1瓶， 4℃保存；

試劑二：液體32.8μL×1支，4℃保存；

試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；

樣本的前處理

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線(xiàn)粒體蛋白的分離：

1、稱(chēng)取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞，加入1mL提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿600g，4℃離心5min。

3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

4、上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線(xiàn)粒體泄漏的PC（此步可選做）。

5、在步驟④的沉淀中加入1mL提取液，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于線(xiàn)粒體PC活性測(cè)定。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；置于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱5分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

3、試劑四的配制：在試劑四瓶中加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

4、在1mL石英比色皿中加入50μL樣本、50μL試劑四和900μL工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.5，需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定，使ΔA小于0.5可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

PC活性計(jì)算：

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PC（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PC（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=1608×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PC（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

在線(xiàn)咨詢(xún)

留言注意事項(xiàng)：

1.遵守中華人民共和國(guó)有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔(dān)一切因您的行為而直接或間接引起的法律責(zé)任。

2.請(qǐng)您真實(shí)的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對(duì)產(chǎn)品有任何疑問(wèn),也可以留言咨詢(xún)。

3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個(gè)人或團(tuán)體的具有廣告性質(zhì)的信息或類(lèi)似言論。

您感興趣的產(chǎn)品*
您的單位*
聯(lián)系人*
聯(lián)系電話(huà)*
詳細(xì)地址*
常用郵箱*
請(qǐng)輸入您對(duì)我們的意見(jiàn)或建議*
驗(yàn)證碼*

同類(lèi)產(chǎn)品

訂購(gòu)流程

訂貨流程

產(chǎn)品訂購(gòu)說(shuō)明:

1、報(bào)價(jià)含普票、運(yùn)費(fèi)。

2、常用試劑備貨充足，除對(duì)溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。

3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細(xì)情況請(qǐng)咨詢(xún)客服。

4、訂貨時(shí)間為工作日每周一至周五16:00之前。

5、如需代為檢測(cè)，標(biāo)本對(duì)環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專(zhuān)人取樣（限省內(nèi)客戶(hù)）。

6、代測(cè)免收代測(cè)費(fèi)，一周出結(jié)果。

7、產(chǎn)品因運(yùn)輸途中包裝破損請(qǐng)拒絕簽收，做退回。我們將在24小時(shí)之內(nèi)為您補(bǔ)發(fā) 損壞產(chǎn)品。

8、如因單位財(cái)務(wù)制度原因，可申請(qǐng)先發(fā)貨，報(bào)賬后付款（此條款僅限醫(yī)院、學(xué)校信譽(yù)良好客戶(hù)）。

付款方式

普票匯款信息

賬戶(hù) 名：上海生物

開(kāi) 戶(hù) 行：中國(guó)銀行山東省分行營(yíng)業(yè)部

賬號(hào)：2169 2341 6278

為方便廣大客戶(hù)辦理貨款我公司提供多個(gè)銀行的賬戶(hù)，學(xué)校、醫(yī)院客戶(hù)購(gòu)買(mǎi)產(chǎn)品如因單位財(cái)務(wù)制度原因可先發(fā)貨待報(bào)賬后匯款，請(qǐng)及時(shí)告知銷(xiāo)售人員已做具體操作。

丙酮酸羧化酶（PC)試劑盒分光光度法50管/48樣

產(chǎn)品目錄

聯(lián)系我們

技術(shù)服務(wù)

商品詳情購(gòu)物流程代測(cè)服務(wù)付款方式常見(jiàn)問(wèn)題

在線(xiàn)咨詢(xún)

同類(lèi)產(chǎn)品

訂貨流程

付款方式