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產(chǎn)品名稱	檢測方法	規(guī)格	貨號
濾紙酶（Filter paper Activity，F(xiàn)PA）試劑盒	分光光度法	50管/24樣	CS-01Ｓ63293

注意：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

纖維素酶是由微生物產(chǎn)生的多組分的酶系，能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖，研究濾紙酶活力對纖維素酶的研究具有非常重要的意義。

商品介紹：

測定原理

濾紙酶水解濾紙產(chǎn)生的還原糖能與3,5-二硝基水楊酸生成紅棕色氨基化合物，在540nm處有最大光吸收，在一定范圍內(nèi)反應(yīng)液顏色深淺與還原糖的量成正比，可測定計(jì)算得濾紙酶的活力。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體40mL×1瓶，4℃保存。

濾紙條：50mg×50條。

酶液提取

1.組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，冰浴勻漿后于4℃，12000rpm離心10min，取上清置于冰上待測。

2.細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：蒸餾水體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后4℃，12000rpm離心10min，取上清置于冰上待測。

3.培養(yǎng)液或其它液體：直接檢測。

測定操作

1.根據(jù)樣本數(shù)量取兩倍數(shù)量的濾紙條和Ep管，每支Ep管中放入一個(gè)卷狀濾紙條（注意要放入底部），作為底物。

2.對照管：取200μL滅活的酶液，加入500μL試劑一，充分混勻，再加入放有濾紙條的Ep管中，標(biāo)注為對照管。

3.測定管：取200μL酶液，加入500μL試劑一，充分混勻，再加入放有濾紙條的Ep管中，標(biāo)注為測定管。

4.對照管和測定管同時(shí)置于50℃水浴鍋中反應(yīng)30min。

5.加入800μL試劑二，沸水浴5min，自來水冷卻后取1mL于1mL玻璃比色皿中測定540nm處吸光值，分別記為A對照管和A測定管。

酶活性計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.2805x - 0.0255，R2 = 0.9991

（1）按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在50℃，pH4.6條件下，每毫克蛋白每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA（U/mg prot）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 0.891×（△A+0.0255）÷ Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在50℃，pH4.6條件下，每克組織每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA（U/g 鮮重）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T

= 0.891×（△A+0.0255）÷ W

（3）按液體體積計(jì)算

酶活性定義：在50℃，pH4.6條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA（U/mL）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反總÷V樣÷T

= 0.891×（△A+0.0255）

（4）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：在50℃，pH4.6條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘分解濾紙產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

FPA（U/104cell）=（△A+0.0255）÷ 0.2805×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）÷V樣總）÷T

= 0.891×（△A+0.0255）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）

V反總：反應(yīng)總體積，1.5mL，V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.2mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min

注意事項(xiàng)

1.用干凈的鑷子取出濾紙條，帶手套卷成卷放入Ep管底部。

2.樣本滅活時(shí)保證同一批樣本處理時(shí)間一致，建議沸水浴十分鐘。

3.批量樣本測定之前先做1-2個(gè)樣本的預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值超過1.2，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

4.顯色后取檢測液時(shí)注意槍頭不要碰到濾紙條，以免帶入毛狀物，影響測定結(jié)果。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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