產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱(chēng)	檢測(cè)方法	規(guī)格	貨號(hào)
丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）試劑盒	分光光度法	50管/48樣	CS-01Ｓ63298

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

PK（EC 2.7.1.40）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化糖酵解過(guò)程中的最后一步反應(yīng)，是糖酵解過(guò)程中的主要限速酶之一，也是產(chǎn)生ATP的關(guān)鍵酶之一，因此測(cè)定PK活性具有重要意義。

商品介紹：

測(cè)定原理

PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脫氫酶進(jìn)一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+，在340nm下測(cè)定NADH下降速率，即可反映PK活性。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：60mL×1瓶，4℃保存;

試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存；；

試劑二：粉劑×2瓶，-20℃保存；

試劑三：液體25μL×2支，4℃保存；

樣本的前處理

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定

（1）試劑二的配制：臨用前取試劑二一瓶，加入22.5mL試劑一和2.65mL蒸餾水充分溶解，置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴5min；現(xiàn)配現(xiàn)用。

（2）試劑三的配制：臨用前取試劑三一支，加入1.5mL蒸餾水充分溶解待用；現(xiàn)配現(xiàn)用。

（3）在1mL石英比色皿中加入50μL樣本、50μL試劑三和900μL試劑二，混勻，立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。

PK活性計(jì)算

1、血清（漿）中PK活力的計(jì)算:

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=2613×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中PK活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=2613×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PK（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=2613×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

PK（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=5.226×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，9.75×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.03 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

在線咨詢(xún)

留言注意事項(xiàng)：

1.遵守中華人民共和國(guó)有關(guān)法律、法規(guī)，尊重網(wǎng)上道德，承擔(dān)一切因您的行為而直接或間接引起的法律責(zé)任。

2.請(qǐng)您真實(shí)的反映產(chǎn)品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對(duì)產(chǎn)品有任何疑問(wèn),也可以留言咨詢(xún)。

3.未經(jīng)本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個(gè)人或團(tuán)體的具有廣告性質(zhì)的信息或類(lèi)似言論。

您感興趣的產(chǎn)品*
您的單位*
聯(lián)系人*
聯(lián)系電話*
詳細(xì)地址*
常用郵箱*
請(qǐng)輸入您對(duì)我們的意見(jiàn)或建議*
驗(yàn)證碼*

同類(lèi)產(chǎn)品

訂購(gòu)流程

訂貨流程

產(chǎn)品訂購(gòu)說(shuō)明:

1、報(bào)價(jià)含普票、運(yùn)費(fèi)。

2、常用試劑備貨充足，除對(duì)溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。

3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細(xì)情況請(qǐng)咨詢(xún)客服。

4、訂貨時(shí)間為工作日每周一至周五16:00之前。

5、如需代為檢測(cè)，標(biāo)本對(duì)環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專(zhuān)人取樣（限省內(nèi)客戶(hù)）。

6、代測(cè)免收代測(cè)費(fèi)，一周出結(jié)果。

7、產(chǎn)品因運(yùn)輸途中包裝破損請(qǐng)拒絕簽收，做退回。我們將在24小時(shí)之內(nèi)為您補(bǔ)發(fā) 損壞產(chǎn)品。

8、如因單位財(cái)務(wù)制度原因，可申請(qǐng)先發(fā)貨，報(bào)賬后付款（此條款僅限醫(yī)院、學(xué)校信譽(yù)良好客戶(hù)）。

付款方式

普票匯款信息

賬戶(hù) 名：上海生物

開(kāi) 戶(hù) 行：中國(guó)銀行山東省分行營(yíng)業(yè)部

賬號(hào)：2169 2341 6278

為方便廣大客戶(hù)辦理貨款我公司提供多個(gè)銀行的賬戶(hù)，學(xué)校、醫(yī)院客戶(hù)購(gòu)買(mǎi)產(chǎn)品如因單位財(cái)務(wù)制度原因可先發(fā)貨待報(bào)賬后匯款，請(qǐng)及時(shí)告知銷(xiāo)售人員已做具體操作。

丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）試劑盒分光光度法50管/48樣

產(chǎn)品目錄

聯(lián)系我們

技術(shù)服務(wù)

商品詳情購(gòu)物流程代測(cè)服務(wù)付款方式常見(jiàn)問(wèn)題

在線咨詢(xún)

同類(lèi)產(chǎn)品

訂貨流程

付款方式

丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）試劑盒分光光度法50管/48樣