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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
線粒體分離和線粒體酶提取試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63322 |
線粒體是半自主性細胞器,不僅是細胞內(nèi)氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要場所,為細胞的活動提供能量,而且在許多生命活動中具有重要調(diào)控作用。因此,準確和全面分離保持正常活性的線粒體已經(jīng)成為許多研究的前提。
原理
利用專門試劑溫和勻漿組織和細胞,再采用差速離心法從勻漿中分離完整線粒體;利用專門試劑,配合超聲波破碎線粒體,可以得到保持活性的線粒體酶。
需自備的儀器和用品
超聲波破碎儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一:50mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:10mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:10mL×1瓶,-20℃保存;
試劑四:1mL×1支,-20℃保存;
提取步驟
1、準確稱取約0.1g組織或收集約500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑四,用冰浴勻漿器或研缽研磨。
2、4 ℃ 600 g離心5min。
3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,4 ℃ 11000 g離心10min。
4、上清液即胞漿提取物,可用于研究線粒體蛋白向胞漿的釋放。
5、沉淀為完整線粒體。含有完整的內(nèi)膜和外膜,并具有線粒體的生理功能??捎糜诰€粒體的生理功能等方面的研究。
6、在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑四,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),可用于線粒體酶活性測定。
7、在沉淀中加入200uL試劑三和2uL 試劑四,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),可用于線粒體蛋白濃度測定。
注意事項
1、 分離線粒體和提取線粒體蛋白質(zhì)的所有步驟均需在冰上或4℃進行,所用溶液需冰浴或4℃預冷。
2、 通常在分離線粒體時前后兩次離心速度選取600g和11,000g,如果希望純度更高,但對線粒體的得率要求不高,前后兩次離心速度可以采用1000g和3500g。
3、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。?
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術有限公司
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產(chǎn)品訂購說明:
1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足,除對溫度要求極其嚴格的產(chǎn)品當天可發(fā)貨。
3、進口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期,詳細情況請咨詢客服。
4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。
5、如需代為檢測,標本對環(huán)境溫度高,可聯(lián)系客服安排專人取樣(限省內(nèi)客戶)。
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