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線粒體復(fù)合體Ⅱ試劑盒分光光度法25管/24樣

  • 產(chǎn)品貨號：CS-01Ｓ63325
  • 產(chǎn)品價格：電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地：進(jìn)口、國產(chǎn)
  • 包裝類型:25管/24樣
  • 采購熱度：260
  • 庫存：47
  • CAS號：
  • 方法：分光光度法
  • 含量：
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內(nèi)容：線粒體復(fù)合體Ⅱ試劑盒質(zhì)量可靠、價格優(yōu)惠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)。

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標(biāo)簽:線粒體復(fù)合體Ⅱ試劑盒 

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商品詳情購物流程代測服務(wù)付款方式常見問題

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產(chǎn)品名稱

檢測方法

規(guī)格

貨號

線粒體復(fù)合體Ⅱ試劑盒

分光光度法

25管/24樣

CS-01Ｓ63325
 注意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：

線粒體復(fù)合體Ⅱ又稱琥珀酸-輔酶Q還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同時輔基FAD還原為FADH2，后者進(jìn)一步還原氧化型輔酶Q生成還原型輔酶Q，是呼吸電子傳遞鏈的支路。

商品介紹：

測定原理

復(fù)合體Ⅱ的催化產(chǎn)物還原型輔酶Q可進(jìn)一步還原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通過檢測2,6-二氯吲哚酚的減少速率來計(jì)算該酶活性。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制

試劑一：25mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：5mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：0.5 mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體25mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；

試劑七：液體2.5mL×1瓶，4℃保存；

樣本的前處理：

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1、準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)菌或細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、將勻漿600g，4℃離心5min。

3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。

4、上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅱ（此步可選做）。

5、步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），用于復(fù)合體Ⅱ酶活性測定。

測定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至605nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定

（1）工作液的配制：臨用前把試劑五和試劑六轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

（2）在1mL玻璃比色皿中加入40μL樣本、100μL試劑七和800μL工作液，立即混勻，記錄605nm處初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。

復(fù)合體Ⅱ活力單位的計(jì)算

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅱ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=559×ΔA÷Cpr

此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。

（2） 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅱ活力(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=113×ΔA÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定義為一個酶活力單位。

復(fù)合體Ⅱ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T =0.226×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，9.4×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.04 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。

注意：
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。

  

3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細(xì)情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

5、如需代為檢測，標(biāo)本對環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專人取樣（限省內(nèi)客戶）。

  

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