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產品名稱	檢測方法	規(guī)格	貨號
脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)AS）活性試劑盒	分光光度法	10管/9樣	CS-01Ｓ63345

注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

FAS是脂肪酸合成關鍵酶，催化乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A而生成長鏈脂肪酸。FAS普遍表達于各種組織細胞中，在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達豐富。

商品介紹：

測定原理：

FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成長鏈脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+沒有；通過測定340nm 光吸收下降速率，計算FAS活性。

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、可調式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體10mL×1瓶，－20℃保存。用前取出置于4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入275 μL試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入275 μL試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

試劑四：液體10 mL×1瓶，4℃保存。

試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入525 μL試劑四，充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

粗酶液提取：

1.組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。12000g，4℃離心40min，取上清置冰上待測。

2.細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后12000g，4℃，離心40min，取上清置于冰上待測。

3.血清等液體：直接測定。

FAS測定操作：

1. 分光光度計預熱30min，調節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑四置于40℃水浴中預熱30 min。

3. 測定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、20μL試劑二、20μL試劑三、820μL試劑四和40μL試劑五，迅速混勻后于340nm處測定吸光值，記錄第30s和90s時吸光值，分別記錄為A1和A2?！?/span>A測=A1-A2。

FAS活性計算公式：

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。

FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△A÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。

FAS(nmol/min/g 鮮重) = (△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷W

（3）按細胞數(shù)量計算

活性單位定義：37℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。

FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數(shù)量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化1nmol NADPH 為1個酶活單位。

FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應體系總體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應時間，1min。

注意：

1. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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