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產(chǎn)品名稱	檢測(cè)方法	規(guī)格	貨號(hào)
?；D(zhuǎn)移酶（alcohol acyl transferase，AAT）活性測(cè)定試劑盒	分光光度法	50管/48樣	CS-01Ｓ63347

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

AAT是一個(gè)多功能蛋白大家族，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種酰基化和去?；磻?yīng)，在基因表達(dá)、代謝和信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要作用。

商品介紹：

測(cè)定原理：

AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙?；蕉〈迹尫诺?/span>CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測(cè)定412 nm吸光度增加速率可計(jì)算AAT活性。

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、無(wú)水乙醇。

試劑組成和配制：

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。

粗酶液提?。?/span>

1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。

2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3.液體：直接檢測(cè)。

AAT測(cè)定操作：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到412 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入45mL試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

3、試劑三的配制：臨用前加無(wú)水乙醇2.5mL充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。

4、空白管：在Ep管或96孔板中加入50μL提取液和900μL工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測(cè)定412nm處吸光值，記為A空白管。

5、測(cè)定管：在Ep管或96孔板中加入50μL樣本和900μL工作液，充分混勻，35℃反應(yīng)15min，加入50μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測(cè)定412nm處吸光值，記為A測(cè)定管?！?/span>A=A測(cè)定管- A空白管，空白管只要做一管。

AAT活性計(jì)算公式：

（1）按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。

AAT (nmol/min /mg prot) = △A ÷（×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。

AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（×d）×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ÷T = 98.04×△A÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。

AAT (nmol/min /104cell) = △A ÷（×d）×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T

= 98.04×△A÷ 細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個(gè)酶活單位。

AAT (nmol/min /mL) = △A ÷（×d）×V反總÷V樣÷T =98.04×△A

：TNB消光系數(shù)，13600L/mol/cm；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白含量，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，15 min。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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2、常用試劑備貨充足，除對(duì)溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。

3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細(xì)情況請(qǐng)咨詢客服。

4、訂貨時(shí)間為工作日每周一至周五16:00之前。

5、如需代為檢測(cè)，標(biāo)本對(duì)環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專人取樣（限省內(nèi)客戶）。

6、代測(cè)免收代測(cè)費(fèi)，一周出結(jié)果。

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