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細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至240nm處，蒸餾水調(diào)零。

2、測定前將CAT檢測工作液37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min。

3、在1mL石英比色皿中加入35μL樣本和1mL工作液，混勻，室溫下立即測定240nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2

注意事項：出現(xiàn)負(fù)值怎么辦？

檢查反應(yīng)過程是否產(chǎn)生氣泡，氣泡多說明酶活性太高，氣泡影響產(chǎn)生了負(fù)值，可以將樣本用提取液稀釋10倍后再檢測。如果稀釋樣本或反應(yīng)體系沒有產(chǎn)生氣泡仍然出現(xiàn)較小的負(fù)值，說明該樣本測不到該酶活。

CAT活性計算：

1、血清（漿）CAT活力的計算:

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

CAT(nmol/min/mL)= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=678×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

CAT(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=678×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

CAT(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=678×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。

CAT(nmol/min /104 cell)＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T =1.356×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，1.035×10-3 L；ε：H2O2摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.035 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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