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標(biāo)簽:總膽固醇(total cholesterol TC)含量測定試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
總膽固醇(total cholesterol,TC)含量測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63339 |
TC包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。
測定原理:
利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇(FC)和游離脂肪酸(FFA),從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC;進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-膽甾烯酮和H2O2;最后利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類化合物;在500nm有特征吸收峰,其顏色深淺與TC含量成正比。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:異丙醇50mL(自備)。
試劑二:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體100μL×1瓶,4℃保存
TC標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,0.5μmol/mL,4℃保存。
TC的提?。?/span>
1、組織中TC的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清,即TC待測液。
2、細(xì)胞、細(xì)菌中TC的提取:先收集400-500萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,加1mL試劑一,超聲波破碎1min(強(qiáng)度20%,超聲2s,停1s),即TC待測液。
3、血清(漿)等樣品:直接測定。
測定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到500 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. TC工作液的配制:臨用前,吸取約0.8mL試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中,充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中,充分混勻,TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC標(biāo)準(zhǔn)液和900μL TC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測定管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC待測液和900μL TC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。
5. 空白管:依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL 試劑一和900μL TC工作液,混勻,37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。
注意:標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測定一次。
計(jì)算公式:
1. 血清(漿)中TC含量:
TC(μ mol /dL)= C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×100
= 50×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
C標(biāo)準(zhǔn)液:0.5μmol/mL;100 mL:1dL=100 mL。
2. 組織中TC含量:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
TC(μ mol/mg prot)= C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
= 0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算
TC(μ mol / g鮮重)= C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
= 0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液:0.5μmol/mL;樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g/mL
3. 細(xì)胞、細(xì)菌中TC含量:
TC(μ mol /104 cell)= C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷細(xì)菌或細(xì)胞(104 cell /L)
= 0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷細(xì)菌或細(xì)胞(104 cell /L)
C標(biāo)準(zhǔn)液:0.5μmol/mL。
注意事項(xiàng):
最低檢出限為1nmol/mL。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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