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標(biāo)簽:脂氧合酶(Lipoxygenase LOX)活性測(cè)定試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) | |
| 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63341 |
LOX廣泛存在于動(dòng)植物組織中,催化不飽和脂肪酸氧化反應(yīng),導(dǎo)致膜脂過(guò)氧化。在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過(guò)程中具有重要作用。
測(cè)定原理:
LOX催化亞油酸氧化,氧化產(chǎn)物在280nm處有特征吸收峰;測(cè)定280nm吸光度增加速率,來(lái)計(jì)算LOX活性。
自備儀器和用品:
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測(cè)。
測(cè)定:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到280nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 在試劑三中加入25mL試劑二(振蕩混勻1min),在30℃水浴中預(yù)熱10 min以上。用不完的試劑4℃保存。
3. 對(duì)照管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL樣本和900μL試劑二,30℃反應(yīng)30min后,記錄A對(duì)照。
4. 測(cè)定管:依次在1mL石英比色皿中加入100μL樣本和900μL試劑三,30℃反應(yīng)30min后,記錄A測(cè)定。
5. ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照
LOX活性計(jì)算公式:
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.01個(gè)單位為1個(gè)酶活單位。
LOX (U/mg prot) =ΔA×V反總÷(Cpr×V樣)÷T×100
= 33.33×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化0.01個(gè)單位為1個(gè)酶活單位。
LOX (U/g 鮮重) =ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T×100
= 33.33×ΔA÷W
Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL,需另外測(cè)定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,100μL=0.1mL;V反總:反應(yīng)總體積,1mL;V樣總:上清液總體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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