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標(biāo)簽:查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase CHI)試劑盒
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產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63330 |
查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)是第一個(gè)被認(rèn)識(shí)的黃酮類化合物合成相關(guān)酶,也是黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。查爾酮異構(gòu)酶和查爾酮合酶一起構(gòu)成了黃酮類化合物生物合成的限速酶。
測(cè)定原理:
查爾酮異構(gòu)酶(CHI)催化查爾酮環(huán)化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮,通過測(cè)定381nm下的吸光度變化表示CHI的活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;用時(shí)加入50mL試劑一充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至381nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定表
在1mL玻璃比色皿中加入50μL上清和950μL試劑二,立即混勻并記錄381nm下初始吸光值A1和37℃保溫30min后的吸光值A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。
CHI活性計(jì)算:
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每小時(shí)A381變化0.1為一個(gè)酶活力單位。
CHI(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.1÷T =400×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每小時(shí)A381變化0.1為一個(gè)酶活力單位。
CHI(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.1÷T =400×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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