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標(biāo)簽:BCA法蛋白含量測定試劑盒
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詳細地址:上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
BCA法蛋白含量測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63362 |
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測定原理
堿性條件下,蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將Cu2+還原成Cu+;2分子的BCA與Cu+結(jié)合,生成紫色絡(luò)合物,在540-595nm有吸收峰,562nm處吸收峰最強。
自備儀器和用品
臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計、移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
試劑A:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑B:液體1.2mL×1支,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)蛋白:液體2 mL×1支,4℃保存。
工作液配制:臨用前請根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×1 mL),將試劑A和B按照50:1的比例混合,蓋緊后充分混勻。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取
1.液體樣品:澄清無色液體樣品可以直接測定。
2.組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液(自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水)
冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即待測液。
3. 細菌、細胞:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
測定操作
1. 分光光度計預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到562 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 工作液置于60℃水浴預(yù)熱30 min。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
計算公式
Cpr (mg/mL) = C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
= 0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
Cpr (mg/g)= C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷ W
= 0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷ W
W: 樣本質(zhì)量,g
注意事項
BCA法蛋白含量測定試劑盒,適用于測定蛋白濃度在20-5000μg/ml樣品。測定前取1-2個樣做預(yù)實驗,若A測定管-A空白管﹥1.5,需將樣本用提取液稀釋后再測定,以確保測定的準(zhǔn)確性。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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