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標(biāo)簽:一氧化氮(Nitric oxide NO)含量測(cè)定試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
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谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
非紅細(xì)胞血影蛋白β4(SPTβN4)ELISA試劑盒樣本處理及要求
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產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
一氧化氮(Nitric oxide,NO)含量測(cè)定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63365 |
NO(Nitric Oxide,NO)廣泛分布于生物體內(nèi)神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中,特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信息物質(zhì),發(fā)揮信號(hào)傳遞的作用,是一種新型的生物信使分子,在機(jī)體的生理、病理過程中起著重要的作用。
測(cè)定原理
NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO2—,在酸性條件下,NO2—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物,進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合,產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰,測(cè)定其吸光值,可以計(jì)算NO含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。(用之前60℃加熱震蕩15min)
樣品處理
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。10000g,4℃離心15min,取上清,置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心15min,取上清置于冰上待測(cè)。
3.體液和培養(yǎng)液等其它液態(tài)樣品:直接測(cè)定。
測(cè)定步驟和操作表
混勻,室溫靜置15min, 1mL玻璃比色皿,測(cè)定A550,ΔA=A測(cè)定-A空白
NO含量計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為:y= 0.016x -0.0103,R2= 0. 9986
1、組織樣品:
(1)按樣本質(zhì)量計(jì)算
NO含量(μmoL/g 鮮重)=(ΔA +0.0103)÷0.016×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×10-3
= 0.14×(ΔA +0.0103)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計(jì)算
NO含量(μmoL/mg prot)=(ΔA +0.0103)÷0.016×V反總÷(V樣×Cpr)×10-3
= 0.14×(ΔA +0.0103)÷Cpr
2、細(xì)胞:
NO含量(μmol/104 cell)=(ΔA +0.0103)÷0.016×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)×10-3
= 0.14×(ΔA +0.0103)÷細(xì)胞數(shù)量(萬個(gè))
3、其他樣品:
NO含量(μmoL/L)=(ΔA +0.0103)÷0.016×V反總÷V樣
= 140×(ΔA +0.0103)
V反總:反應(yīng)總體積,0.9mL;V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.4mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣品質(zhì)量,g;Cpr:蛋白濃度,mg/mL
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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