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標(biāo)簽:木質(zhì)素過氧化物酶(Lignin peroxidase Lip)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
木質(zhì)素過氧化物酶(Lignin peroxidase,Lip)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63407 |
木質(zhì)素過氧化物酶(EC
測(cè)定原理
木質(zhì)素過氧化物酶催化天青脫甲基,在651nm處測(cè)定吸光值減少。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、低溫離心機(jī)、分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液器、冰。
試劑組成和配制
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入80mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存1個(gè)月。
試劑二:液體12mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體12mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取
1.組織:按照質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3.培養(yǎng)液或其它液體:直接檢測(cè)。
測(cè)定操作
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至651nm,蒸餾水調(diào)零。
2、臨用前按每個(gè)樣本試劑一:試劑二:試劑三= 400:200:200(μL)的比例配制工作液,現(xiàn)配現(xiàn)用。
3、在1mL玻璃比色皿中依次加入如下試劑
酶活計(jì)算公式
1.按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A651變化0.02為一個(gè)酶活力單位。
LiP活性(U/mg prot)= ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.02÷T =125×ΔA÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A651變化0.02為一個(gè)酶活力單位。
LiP活性(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.02÷T =125×ΔA÷W
3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A651變化0.02為一個(gè)酶活力單位。
LiP活性(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.02÷T =0.25×ΔA
4.按照液體體積計(jì)算
酶活性定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A651變化0.02為一個(gè)酶活力單位。
LiP活性(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.02÷T =125×ΔA
V反總:反應(yīng)總體積,1mL;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.2mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,2min
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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