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Hephaestin (HP)作為銅藍蛋白的同系物,是近年來發(fā)現(xiàn)的鐵轉運蛋白亞鐵氧化酶，HP屬亞鐵氧化酶家族成員,具有亞鐵氧化酶的活性,參與體內(nèi)鐵代謝。HP的表達可受鐵、銅及鋅等金屬離子的調(diào)節(jié)。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+，在介導鐵的跨膜轉運中有重要作用。

商品介紹：

測定原理：

HP催化Fe2+氧化為Fe3+，Fe2+和ferrozine反應顯色，在560 nm下有特征吸光值。通過測定Fe2+的減少速率可測得亞鐵氧化酶的活性。

自備用品：

可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體50 mL×1瓶，4℃保存;

試劑二：液體3 mL×1瓶，4℃保存;

試劑三：液體30 mL×1瓶，4℃避光保存。

粗酶液提?。?/span>

按照組織質量（g）：水mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1.分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至560 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 在玻璃比色皿中加入下列試劑

HP活性計算:

標準曲線：y = 16.427x - 0.0006，R2 = 0.9998；(x為標準品濃度，μmol/mL；y為吸光值ΔA)

（1）按樣本質量計算

單位定義：每g樣本每分鐘氧化1nmol Fe2+定義為一個酶活力單位。

HP（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0006）÷ 16.427×V總÷T ÷(W× V樣÷V樣總)× 1000

= 20.29×（△A+0.0006）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg蛋白每分鐘氧化1nmol Fe2+定義為一個酶活力單位。

HP（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0006）÷ 16.427×V總÷T ÷（Cpr×V樣）× 1000

= 20.29×（△A+0.0006）÷Cpr

V總：反應體系體積，0.1 mL；V樣：加入樣本體積0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，30min；W：樣品質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；1000，μmol到nmol的轉換系數(shù)。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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亞鐵氧化酶（Hephaestin,HP）試劑盒分光光度法50管/24樣

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