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MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無脊椎動物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝，含量較低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纖維化的程度。此外，MAO活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂，從而引發(fā)多種病癥。

商品介紹：

測定原理

MAO催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛，進(jìn)一步氧化成酸；底物在360nm處有特征吸收峰，測定360nm光吸收下降的速率，計算MAO活性。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。

提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體5mL×1瓶，4℃避光保存。

粗酶液提取

1.組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液一）進(jìn)行冰浴勻漿，10000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1.0 mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定）取上清置于冰上待測。

2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1.0 mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定），取上清置于冰上待測。

3.血清：直接測定。

測定操作表

注意：空白管只需測定一次。

MAO活性計算公式

1、按蛋白含量計算

酶活定義：37℃，pH7.6時，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

DAO活性（nmol/min / mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 114×ΔA÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計算

酶活定義：37℃，pH7.6時，每克樣品1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

DAO活性（nmol/min / g 鮮重）=×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T = 114×ΔA÷ W

3、按照細(xì)胞數(shù)量計算

酶活定義：37℃，pH7.6時，每104 個細(xì)胞1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

DAO活性（nmol/min / 104 cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T

= 114×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

4、按照液體體積計算

酶活定義：37℃，pH7.6時，每升血清1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個酶活單位。

DAO活性（nmol/min /L）=×V反總÷V樣=114000×ΔA

ε：底物摩爾消光系數(shù)，1.46 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時間，60min，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項

1、吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。

2、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。

3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細(xì)情況請咨詢客服。

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

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