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標(biāo)簽:可溶性果膠(WSP)含量試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
可溶性果膠(WSP)含量試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63393 |
果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分,主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,是許多高等植物細(xì)胞壁中含量最豐富的多糖成分,其獨(dú)特的物理、化學(xué)性質(zhì)影響著植物源食品的口感和品質(zhì)。果膠間以Ca2+橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián),通過(guò)不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠,如水溶性果膠(WSP)、離子結(jié)合型果膠(ISP)和共價(jià)結(jié)合果膠(CSP)。
測(cè)定原理:
利用酸溶液提取得到(WSP)可溶性果膠,采用咔唑比色法測(cè)定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng),生成物質(zhì)在530 nm處有最大吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、80%乙醇、丙酮、濃硫酸(不允許快遞)、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體50mL× 1瓶,4℃保存。
試劑二:液體50mL× 1瓶,4℃保存。
試劑三:標(biāo)準(zhǔn)液1mL× 1支,4℃保存。
試劑四:液體5 mL× 1瓶,4℃保存;
樣品的前處理:
1、細(xì)胞壁的提?。喝〖s0.3g樣本,加入1mL 80%乙醇,室溫快速勻漿,95℃水浴20min,冷卻至室溫,4000g 25℃離心10min,棄上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(渦旋振蕩2min左右,4000g 25℃離心10min,棄上清即可),沉淀即為粗細(xì)胞壁,加入1mL試劑一(去除淀粉)浸泡15小時(shí),4000g 25℃離心10min,棄上清,將沉淀干燥,稱(chēng)重得細(xì)胞壁物質(zhì)(CWM)。
2、WSP的提?。悍Q(chēng)取烘干的CWM 3mg,加入1mL試劑二,充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅(jiān)硬,可先研碎后再加入1mL試劑二勻漿,或者用勻漿器勻漿)。8000g 4℃離心10min,取上清液待測(cè)。
測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至530nm處,蒸餾水調(diào)零;試劑三和試劑四37℃預(yù)熱10min以上;
2、操作表:
混勻95℃水浴5min后,530nm處讀取吸光值,空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、對(duì)照管和測(cè)定管吸光值分別記為A1、A2、A3和A4。若A大于2,需將待測(cè)樣本用蒸餾水稀釋?zhuān)上♂?/span>10倍或20倍)??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管,每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
WSP含量計(jì)算:
WSP含量(mg /g 干重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數(shù)=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數(shù)
C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.05mg/mL;V1:加入樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL; W:樣本干重,g。
注意:最低檢測(cè)限為50μg /g 干重
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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