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1、細(xì)菌或細(xì)胞的處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），冰浴中勻漿。8000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL提取液），冰浴中勻漿。8000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至505nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。

3、工作液的配制：使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合，用多少配多少。

4、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，置37℃（哺乳動(dòng)物）或25'C（其它物種）保溫15min后，于505nm波長處讀取吸光度。計(jì)算ΔA=A測定管-A對(duì)照管。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

THL活力計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 0.4858x - 0.0042，R2 = 0.9999；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值。

2、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL活力(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(V樣×Cpr)÷T×1000

=366× (ΔA+0.0042) ÷Cpr

3、按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL活力(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T×1000

=366×(ΔA+0.0042)÷W

4、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL活力(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(500 ×V樣÷V樣總) ÷T×1000

=0.732×(ΔA+0.0042)

5、按血清（漿）體積計(jì)算

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

THL活力(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反總÷(V液 ×V樣÷V樣總) ÷T×1000

=3660×(ΔA+0.0042)

V樣：加入樣本體積：0.09mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.24mL；V液：加入血清（漿）體積，0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬；T：反應(yīng)時(shí)間，15min；

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細(xì)情況請(qǐng)咨詢客服。

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5、如需代為檢測，標(biāo)本對(duì)環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專人取樣（限省內(nèi)客戶）。

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海藻糖酶（Trehalase，THL）試劑盒分光光度法50管/24樣

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