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標(biāo)簽:乳酸含量(lactic acid LA)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱(chēng) | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
乳酸含量(lactic acid,LA)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63411 |
乳酸是生物體代謝過(guò)程中重要的中間產(chǎn)物,與糖代謝、脂類(lèi)代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān),乳酸含量是評(píng)估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。
測(cè)定原理
乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時(shí)使NAD+還原生成NADH和H+,H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質(zhì),在530nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液:液體55mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體5mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體12mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1支,-20℃避光保存。臨用前加入1.5mL蒸餾水充分溶解。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加15mL蒸餾水充分溶解。
試劑五:粉劑×1支,4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,4℃保存。
顯色液:臨用前根據(jù)用量按照提取液(V):試劑三(V):試劑四(V):試劑五(m)=1(mL):0.3(mL):3(mL):15(mg)的比例充分混勻。(注意:現(xiàn)配現(xiàn)用,用多少配多少,在棕色瓶中配制,試劑盒中帶有5個(gè)棕色空瓶)
樣本處理
1.組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取上清測(cè)定。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);于4℃,12000g離心10min,取上清測(cè)定。
3.血清:直接測(cè)定。
測(cè)定操作
計(jì)算公式
1. 按照蛋白含量計(jì)算
LA含量(μmol/mg prot)=△A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ Cpr
=2×△A樣÷△A標(biāo)÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
LA含量(μmol/g 鮮重)=△A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ W
=2×△A樣÷△A標(biāo)÷ W
3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
LA含量(μmol/104 cell)=△A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量
=2×△A樣÷△A標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
LA含量(μmol/mL)=△A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)
=2×△A樣÷△A標(biāo)
C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)品濃度,2mmol/L ;W:樣本質(zhì)量,g/mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL
注意事項(xiàng)
1.若吸光值超過(guò)2,請(qǐng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤龠M(jìn)行測(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2.最低檢出限為1.8μmol/L。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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