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1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、試劑五工作液的配制：將試劑五原液：試劑五稀釋液=1μL:329μL稀釋，用多少配多少。

3、將試劑一、二、三、四和試劑五工作液置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預(yù)熱5分鐘。

4、加樣表：

注意事項：如果一次性測定樣本數(shù)較多，可將試劑一、二、三、四、和試劑五工作液按比例配成混合液。

PEPC活性計算：

1、血清（漿）PEPC活力計算

單位定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

PEPC（nmol/min/mL））＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1624×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中PEPC活力計算

（1）按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。

PEPC（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1624×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

PEPC（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=1624×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

單位定義：每1萬個細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。

PEPC（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=3.248×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，1.010×10-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實(shí)驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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