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標(biāo)簽:維生素B1(Vitamin B1 VB1)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
小鼠糖皮質(zhì)激素受體αelisa檢測試劑盒樣本處理及要求
兔β淀粉樣蛋白1-40elisa檢測試劑盒注意事項(xiàng)
谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)測試盒實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
非紅細(xì)胞血影蛋白β4(SPTβN4)ELISA試劑盒樣本處理及要求
人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2(GSK2)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
維生素B1(Vitamin B1,VB1)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63503 |
維生素B1(Vitamin B1)是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分,參與細(xì)胞代謝中的三羧酸循環(huán),是維持機(jī)體正常代謝必須的水溶性維生素,在生物體能量代謝中有重要的作用。
測定原理
VB1在堿性條件下還原鐵氰化鉀生成亞鐵氰化鉀,亞鐵氰化鉀與Fe3+在弱酸條件下生成普魯士藍(lán),在704nm有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1 mL玻璃比色皿、蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體35mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體1mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體5mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體12mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:液體6mL×1瓶,4℃避光保存。
樣本處理
1.組織:將樣品磨碎,按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入0.6mL提取液)加入提取液,60℃浸提30min,加蒸餾水0.4mL,混勻后于25℃,13000g離心10min,取上清測定(動物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30分鐘)。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入0.6mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);加蒸餾水0.4mL,混勻后于25℃,13000g離心10min,取上清測定。
3.血清:直接測定。
測定操作
計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.017x+0.0031,R2 = 0.9991;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度:μg/mL;y為△A(A測定管-A空白管)
1. 按照蛋白含量計(jì)算
VB1含量(μg/mg prot)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷Cpr
= 58.8×(△A-0.0031)÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VB1含量(μg/g鮮重)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷(W÷V樣總)
= 58.8×(△A-0.0031)÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB1含量(μg/104 cell)=(△A-0.0031)÷ 0.017÷(細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)
= 58.8×(△A-0.0031)÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VB1含量(μg/mL)=(△A-0.0031)÷ 0.017
= 58.8×(△A-0.0031)
V樣總:加入提取液體積,1mL; Cpr:蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
注意事項(xiàng)
1.若測定結(jié)果中吸光值超過1,請將樣本稀釋后進(jìn)行測定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2.蛋白濃度較高的樣品,比如動物組織,若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生,將樣本稀釋后再測定,在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3.顯色完成后立即進(jìn)行測定。
4.標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.1-10μg/mL。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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