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2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3.血清等液體：直接測定。

測定操作表

酶活性計(jì)算公式

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量為一個(gè)酶活力單位（U）。

DAO活性（nmol/min/mg prot）= ×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 18×A460÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算：

酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

DAO活性（nmol/min/g）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 18×A460÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：

酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

DAO活性（nmol/min/104cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T= 18×A460÷細(xì)胞數(shù)量

(4) 按液體體積計(jì)算

酶活性定義：在pH7.2，溫度為37℃條件下，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

DAO活性（nmol/min/mL）= ×V反總÷V樣÷T= 18×A460

ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.25mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min

注意事項(xiàng)

1、如果OD值小于0.01，適當(dāng)加大提取用的樣本質(zhì)量； OD值大于0.8，粗酶液可適當(dāng)稀釋，或者減少提取用樣本量。

2、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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二胺氧化酶（Diamine Oxidase，DAO）試劑盒分光光度法50管/24樣

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