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標(biāo)簽:多功能氧化酶((mixed function oxidase MFO)試劑盒
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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
多功能氧化酶((mixed function oxidase,MFO)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63512 |
多功能氧化酶又稱混合功能氧化酶,可產(chǎn)生降解反應(yīng),可使原化學(xué)物質(zhì)變?yōu)榈投镜幕驘o毒的物質(zhì)從體內(nèi)排出;還可產(chǎn)生激活反應(yīng),可使原化學(xué)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為具有親電子性質(zhì),導(dǎo)致毒性增強(qiáng),成為致突變物或終致癌物。近年來對混合功能氧化酶系與外源性化學(xué)物質(zhì)相互作用的深入研究,對于從分子生物學(xué)水平上進(jìn)一步了解外源性化學(xué)物質(zhì)的毒作用具有重要意義。
測定原理:
MFO催化對硝基苯甲醚產(chǎn)生對硝基苯酚,在400nm下有特征吸光值。
自備用品:
分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水、氯仿。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃避光保存;
試劑二:粉劑×3管,-20℃保存;臨用前取一管加入2mL水溶解,現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑三:液體30mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體80mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
按照組織質(zhì)量(g):提取液(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,蒸餾水調(diào)零。
2、在10mL管中依次加入如下試劑
MFO活性計算:
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0238x + 0.0021,R2 = 0.9997;y,吸光度;x,標(biāo)準(zhǔn)品濃度,單位nmol/mL。
(1)按樣本質(zhì)量計算
單位定義:每g樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
MFO(nmol/min/g 鮮重)=(△A-0.0021)÷0.0238×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=4.2×(△A-0.0021)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
MFO(nmol/min/mg prot)=(△A-0.0021)÷0.0238×V總÷(V樣×Cpr)÷T
=4.2×(△A-0.0021)÷Cpr
V總:最終萃取液體積,1.5 mL;V樣:反應(yīng)中樣品體積,500μL;T:反應(yīng)時間,30min;W:樣品質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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