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標簽:蛋白質羰基含量測定試劑盒
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產品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
蛋白質羰基含量測定試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63515 |
蛋白質羰基是多種氨基酸在蛋白質的氧化修飾過程中的早期標志,其含量高低表明蛋白質氧化損傷程度的大小,是衡量蛋白質氧化損傷的主要指標。
測定原理
羰基與2,4-二硝基苯肼反應生成紅色2,4-二硝基苯腙,在370nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機、漩渦震蕩儀、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水,無水乙醇,乙酸乙酯。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑0.1g×5支,4℃避光保存。(使用前根據樣品數,每支加1mL水溶解,每支為10個樣品用量)
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:根據測定樣品量,將乙酸乙酯和無水乙醇等體積混合。
試劑六:液體100mL×1瓶,4℃保存。
樣品處理
1.組織樣品:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,于4℃,4000g離心10min,取上清,加入0.1mL試劑一,室溫放置10min,4℃,10000g離心10min,取上清待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3.血清等液體樣本:直接測定。
測定步驟和操作表
計算公式
1.按照樣本蛋白濃度計算
蛋白質羰基含量(μmol/mg prot)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷(V樣×Cpr) =0.227×ΔA370÷Cpr
2.按照樣本重量計算
蛋白質羰基含量(μmol/g 鮮重)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷(W ×V樣÷V樣總) =0.227×ΔA370÷W
3. 按照細胞數量計算
蛋白質羰基含量(μmol/104cell)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷(細胞數量 ×V樣÷V樣總) =0.227×ΔA370÷細胞數量
4.按照液體體積計算
蛋白質羰基含量(μmol/mL)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷V樣=0.227×ΔA370
V反總:反應體系總體積,1mL;ε:羰基微摩爾消光系數,22×10-3 L/μmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.2 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL,W:樣本質量,g
注意事項
1. 試劑一使用之前根據要測定的樣品數現配,配置好后4℃保存,若變?yōu)楹谏?,則不能使用。
2. 試劑二見光易分解,反應需嚴格避光。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術有限公司
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