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2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。

3.血清或培養(yǎng)液：直接測定。

測定操作表

超氧陰離子含量計算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0242x - 0.0027，R2=0.9980

1. 組織：

（1）按照樣本質(zhì)量計算

超氧陰離子含量（nmol/g 鮮重）= (ΔA +0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2

=148.76×(ΔA +0.0027)÷W

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ g•min）=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T

=7.44× (ΔA +0.0027)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)濃度計算

超氧陰離子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣×Cpr)×2

=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ mg prot•min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T

=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr

2. 細(xì)菌，真菌：

超氧陰離子含量（nmol/104 cell）= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)×2

= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/104 cell•min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量÷T

=7.44× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量

3. 血清或培養(yǎng)液

超氧陰離子含量（nmol/mL）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷V樣×2

=148.76× (ΔA+0.0027)

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/mL•min）= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T

= 7.44× (ΔA+0.0027)

V樣總：加入提取液體積，1 mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.9mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.5mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min；2： 2分子O2－參與反應(yīng)生成1分子NO2－。

注意事項

1、吸光值大于2，樣品適當(dāng)稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2、樣品制備好之后，立刻進(jìn)行測定，請勿將樣品進(jìn)行長時間的低溫保存，以免影響測定結(jié)果。

3、試劑四有一定的毒性，請操作時做好防護(hù)措施。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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