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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
二氫黃酮醇還原酶(Dihydro flavonol reductase,DFR)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63510 |
二氫黃酮醇還原酶是類黃酮合成途徑中的一個關鍵酶,在決定植物的花色、葉色、果色和其他經(jīng)濟器官的色澤及其營養(yǎng)品質方面起著重要作用。
測定原理
二氫黃酮醇還原酶作用于二氫槲皮素產(chǎn)生兒茶素,可與香草醛縮合形成紅色化合物,在500nm處有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
研缽、低溫離心機、震蕩儀、氮吹儀、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、水浴鍋、無水乙醇、乙酸乙酯。
試劑組成和配制
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體3mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加5mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑四:液體40mL×2瓶,4℃避光保存。
酶液提取
1.組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2.液體:直接檢測。
測定操作表
酶活性計算公式
標準曲線:y=0.0184x+0.0002,R2=0.999
(1)按照蛋白濃度計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/mg prot)=(△A-0.0002)÷0.0184×V反總÷(V樣×Cpr)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/g 鮮重)= (△A-0.0002)÷0.0184×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)÷W
(3)按液體體積計算
酶活性定義:在30℃,pH7.5條件下,每毫升液體每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生1mmol兒茶素所需的酶量為一個酶活力單位。
DFR活性(mmol/min/mL)=(△A-0.0002)÷0.0184×V反總÷V樣÷T÷2
= 9.06×(△A-0.0002)
V反總:反應總體積,1mL;V樣:反應體系中樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W,樣本質量,g;T:反應時間,30min
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術有限公司
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