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標(biāo)簽:蔗糖酶(sucrase)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
蔗糖酶(sucrase)試劑盒 | 分光光度法 | 50管/24樣 | CS-01S63542 |
蔗糖酶(EC
測定原理:
本試劑盒采用3.5-二硝基水楊酸法測定蔗糖酶催化產(chǎn)生的還原糖的含量,由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5-二硝基水楊酸與還原糖共熱被還原成棕紅色的氨基化合物,在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比。此法操作簡便、迅速、雜質(zhì)干擾較小。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、沸水浴、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體2.5mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1支 ,4℃保存,用時(shí)加入1.5mL蒸餾水充分溶解;用不完的試劑4℃保存;
試劑三:液體5mL×1瓶,常溫保存;
樣品測定的準(zhǔn)備:
按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
加樣表和測定步驟:
蔗糖酶活力計(jì)算:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.1296x -0.12;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、按照蛋白濃度計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化水解1μg蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。
蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。
3、按樣本鮮重計(jì)算
單位定義:每g組織每分鐘催化水解1μg蔗糖定義為一個(gè)酶活力單位。
蔗糖酶活力(μg/min/g鮮重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12) ÷W。
1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,10min; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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