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標(biāo)簽:脂肪酶(Lipase LPS)活性試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
脂肪酶(Lipase,LPS)活性試劑盒 | 分光光度法 | 50管/48樣 | CS-01S63560 |
LPS又稱甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和單酯)。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。
測定原理:
LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用銅皂法測定脂肪酸生成速率,即可計(jì)算LPS活性。
自備儀器和用品:
研缽、臺式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、甲苯100mL、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體90mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體14mL×1瓶,4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。
試劑三:甲苯100mL×1瓶,4℃保存(自備)。
試劑四:液體20mL×1瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體10μL×1瓶,10 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯,充分溶解。
粗酶液提?。?/span>
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。12000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后12000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3.血清等液體: 直接檢測。
LPS測定操作:
1.分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長到710 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min以上。
2.在5mL EP管中依次加入下列試劑
LPS活性計(jì)算公式:
1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞LPS活性
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷W
(3)按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義:37℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol /min/104cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷細(xì)胞數(shù)量
2. 血清等液體LPS活性
活性單位定義:37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
LPS (μmol /min/mL) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷V樣÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]
C標(biāo)準(zhǔn)品:10 μmol/mL;V反總:反應(yīng)總體積,2mL;V樣:反應(yīng)中加入樣本體積,0.125mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒;W:樣本質(zhì)量,g;T:催化反應(yīng)時(shí)間,10 min。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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