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標(biāo)簽:磷脂酶C(?Phospholipases?C PLC?)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
小鼠糖皮質(zhì)激素受體αelisa檢測(cè)試劑盒樣本處理及要求
兔β淀粉樣蛋白1-40elisa檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)
谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
非紅細(xì)胞血影蛋白β4(SPTβN4)ELISA試劑盒樣本處理及要求
人血清/糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)激酶2(GSK2)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
公司上萬種科研產(chǎn)品,主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校,是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān),確保每一個(gè)出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
磷脂酶C(?Phospholipases?C,PLC?)試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63839 |
注意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
磷脂酶C(EC
測(cè)定原理
磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對(duì)硝基苯酚,在410nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體102mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體8mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取
1.組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
3.血清:直接測(cè)定。
測(cè)定操作
酶活計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0191x - 0.0103,R2 = 0.9991
1.按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義:每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 17.45×(△A+0.0103)÷ Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義:每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性(nmol/min/g 鮮重)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
= 17.45×(△A+0.0103)÷ W
3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性(nmol/min/104 cell)=(△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T
= 17.45×(△A+0.0103)÷ 細(xì)胞數(shù)量
4.按照液體體積計(jì)算
酶活性定義:每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性(nmol/min/mL)= (△A+0.0103)÷ 0.0191×V反總÷V樣÷T
= 17.45×(△A+0.0103)
V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0095x - 0.0103,R2 = 0.9991
1.按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義:每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 35.09×(△A+0.0103)÷ Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義:每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性(nmol/min/g 鮮重)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
= 35.09×(△A+0.0103)÷ W
3.按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義:每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性(nmol/min/104 cell)=(△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T
=35.09×(△A+0.0103)÷ 細(xì)胞數(shù)量
4.按照液體體積計(jì)算
酶活性定義:每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對(duì)硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性(nmol/min/mL)= (△A+0.0103)÷ 0.0095×V反總÷V樣÷T
= 35.09×(△A+0.0103)
V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,30min
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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