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產(chǎn)品名稱	檢測(cè)方法	規(guī)格	貨號(hào)
可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶（Soluble acid invertase, S-AI）試劑盒	微量法	100管/48樣	CS-01Ｓ63835

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)最適 pH，Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性轉(zhuǎn)化酶（NI）兩種類型。

商品介紹：

AI的最適pH為3～5。AI分為可溶性AI(S-AI)和細(xì)胞壁不溶性AI（B-AI）兩種類型。S-AI主要存在于細(xì)胞液泡或自由空間中，最適 pH 為4.5~5.0（酸性），通過降解液泡中蔗糖，調(diào)節(jié)液泡中蔗糖的利用和果實(shí)內(nèi)糖類的積累。

測(cè)定原理：

S-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與S-AI活性成正比。

自備用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存;

試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存;

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入10mL試劑一充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存;

試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存；

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟和加樣表：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至510nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定，（在EP管中依次加入下列試劑）：

S-AI活性計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。

（1）按蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：37℃每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

S-AI活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2）按鮮重計(jì)算：

單位的定義：37℃每g組織每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

S-AI活性（μg/min/g鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05mL；V2：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。

（1）按蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：37℃每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

S-AI活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2）按鮮重計(jì)算：

單位的定義：37℃每g組織每分鐘產(chǎn)生1μg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

S-AI活性（μg/min/g鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2)÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05mL；V2：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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