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公司上萬種科研產(chǎn)品，主要供應各大科研單位和學校，是國內(nèi)眾多科研單位的供應商。公司嚴把質(zhì)量關，確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格，讓您買的省心，用得放心。
| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 磷脂酶C（?Phospholipases?C，PLC?）試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01Ｓ63839 |
注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
磷脂酶C（EC
測定原理
磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對硝基苯酚，在410nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、超速冷凍離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體102mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體8mL×1瓶，4℃保存。
酶液提取
1.組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
2.細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
3.血清：直接測定。
測定操作
酶活計算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ W
3．按照細胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ 細胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mL）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷V樣÷T
= 17.45×（△A+0.0103）
V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間，30min
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.0095x - 0.0103，R2 = 0.9991
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 35.09×（△A+0.0103）÷ Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
= 35.09×（△A+0.0103）÷ W
3．按照細胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量) ÷T
=35.09×（△A+0.0103）÷ 細胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mL）= （△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷V樣÷T
= 35.09×（△A+0.0103）
V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應時間，30min
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司
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