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標(biāo)簽:蔗糖磷酸化酶(Sucrose Phosphorylase SP)試劑盒
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公司上萬種科研產(chǎn)品,主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校,是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān),確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
蔗糖磷酸化酶(Sucrose Phosphorylase, SP)試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63829 |
注意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
SP(EC
測定原理:
SP能夠以磷酸為受體,催化蔗糖產(chǎn)生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加。測定340nm吸光度增加速率,即可計算SP活性。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1支,-20℃避光保存,臨用前加2.5mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:粉劑×1支,-20℃避光保存,臨用前加5mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
粗酶液提?。?/span>
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清待測。
2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
測定操作表:
1.酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至340nm。
2.操作表
SP活性計算公式:
1. 按照蛋白濃度計算
酶活定義:37℃,pH6.8時,每毫克蛋白質(zhì)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個酶活單位。
SP活性(nmol/min/mg prot)=×V反總÷V樣÷Cpr÷T=1608×△A÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計算
酶活定義:37℃,pH6.8時,每克樣本每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個酶活單位。
SP活性(nmol/min/g 鮮重)=×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=1608×△A÷W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活定義:37℃,pH6.8時,每104個細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個酶活單位。
SP活性(nmol/min/104 cell)=×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量(萬個))÷T=1608×△A÷細(xì)胞數(shù)量(萬個)
:NADPH摩爾消光系數(shù),6220 L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:蛋白濃度,mg/mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,2min
注意事項:
1.可選用BCA法測定蛋白含量試劑盒測定蛋白含量。
2.樣本較多時,可以按照每個樣本試劑一:試劑二:試劑三=120:20:40(μL)的比例配制工作液,用多少配多少,臨用前立刻配制,10分鐘內(nèi)使用。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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產(chǎn)品訂購說明:
1、報價含普票、運費。
2、常用試劑備貨充足,除對溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。
3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期,詳細(xì)情況請咨詢客服。
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