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標(biāo)簽:酪氨酸解氨酶(Tyrosine ammonilyase TAL)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
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公司上萬(wàn)種科研產(chǎn)品,主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校,是國(guó)內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān),確保每一個(gè)出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
酪氨酸解氨酶(Tyrosine ammonilyase,TAL)試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01S63823 |
注意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
TAL廣泛存在于植物和微生物中,是苯丙氨酸代謝途徑的關(guān)鍵酶之一。TAL能夠躍過(guò)肉桂酸-4-羥基化酶(C4H)直接將酪氨酸轉(zhuǎn)化為香豆酸,香豆酸可進(jìn)一步生成白藜蘆醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素類天然產(chǎn)物。
測(cè)定原理:
TAL能夠分解酪氨酸產(chǎn)生香豆酸,使反應(yīng)溶液333nm下的吸光度隨反應(yīng)時(shí)間而上升,根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出TAL活性。
需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板(UV板)、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存;
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)果汁等液體樣品:直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟:
1、酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至333nm。
2、準(zhǔn)備96孔UV板一塊(非普通酶標(biāo)板,普通酶標(biāo)板只能透過(guò)可見(jiàn)光,不能透過(guò)紫外光,檢測(cè)波長(zhǎng)小于340nm務(wù)必使用UV板)。
3、試劑二的配置:臨用前在試劑二瓶中加入10mL試劑一充分溶解待用(用不完的試劑4℃保存一周,注意現(xiàn)配現(xiàn)用),在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。
4、在EP管中依次加入如下試劑
TAL活性計(jì)算:
1、血清(漿)或果汁TAL活性
單位的定義:每分鐘每mL血清(漿)或果汁在每mL反應(yīng)體系中使333nm處吸光值變化
0.005為一個(gè)酶活力單位。
TAL(U/mL)=ΔA×V反總÷( V樣÷V樣總)÷0.005÷T =35×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞TAL活性
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位定義:每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中使333nm處吸光值變化0.005為一個(gè)
酶活力單位。
TAL(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.005÷T =35×ΔA÷Cpr
此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位定義:每分鐘每g組織在每mL反應(yīng)體系中使333nm處吸光值變化0.005為一個(gè)
酶活力單位。
TAL(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =35×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位定義:每分鐘每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中使333nm處吸光值變化0.005為一個(gè)酶活力單位。
TAL(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T =0.07×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.42mL;V樣:加入樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,60 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn)。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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