產(chǎn)品目錄

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產(chǎn)品名稱(chēng)	檢測(cè)方法	規(guī)格	貨號(hào)
超氧陰離子(Oxygen free radical, OFR)試劑盒	微量法	100T/96S	CS-01Ｓ63808

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用，但積累過(guò)多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。

商品介紹：

測(cè)定原理：

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－在對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據(jù)ΔA值可以計(jì)算樣品中O2－含量，反應(yīng)式為NH2OH + 2O2－＋H＋ → NO2－＋ H2O2 ＋ H2O。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體110mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：氯仿，自備。

超氧陰離子提取

1.植物、動(dòng)物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后，10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測(cè)。

2.細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測(cè)。

3.血清或培養(yǎng)液：直接測(cè)定。

測(cè)定操作表

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至530nm。

2、操作表

超氧陰離子含量計(jì)算公式

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y = 0.0242x - 0.0027，R2=0.9980

1. 組織：

（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

超氧陰離子含量（nmol/g 鮮重）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2

=148.76×(ΔA+0.0027)÷W

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ g•min）=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T

=7.44× (ΔA+0.0027)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

超氧陰離子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣×Cpr)×2

=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ mg prot•min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T

=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr

2. 細(xì)菌，真菌：

超氧陰離子含量（nmol/104 cell）= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)×2

= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/104 cell•min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量÷T

=7.44× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量

3. 血清或培養(yǎng)液

超氧陰離子含量（nmol/mL）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷V樣×2

=148.76× (ΔA+0.0027)

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/mL•min）= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T

= 7.44× (ΔA+0.0027)

V樣總：加入提取液體積，1 mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.36mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；2: 2分子O2－參與反應(yīng)生成1分子NO2－。

b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：y = 0.0121x - 0.0027，R2 = 0.9980

1. 組織：

（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

超氧陰離子含量（nmol/g 鮮重）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2

=297.52× (ΔA+0.0027)÷W

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ g•min）=297.52× (ΔA+0.0027)÷W÷T

=14.88× (ΔA+0.0027)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

超氧陰離子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反總÷(V樣×Cpr)×2

=297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ mg prot•min）= 297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr÷T

=14.88× (ΔA+0.0027)÷Cpr

2. 細(xì)菌，真菌：

超氧陰離子含量（nmol/104 cell）=(ΔA+0.0027)÷0.0121× V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)×2

=297.52× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/104 cell•min）=297.52× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量÷T

=14.88× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量

3. 血清或培養(yǎng)液

超氧陰離子含量（nmol/mL）=(ΔA+0.0027)÷0.0121 ×V反總÷V樣×2

=297.52×(ΔA+0.0027)

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/mL•min）= 297.52×(ΔA+0.0027) ÷T

=14.88×(ΔA+0.0027)

V樣總：加入提取液體積，1 mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.36mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；2：2分子O2－參與反應(yīng)生成1分子NO2－。

注意事項(xiàng)

1、OD值大于1，樣品適當(dāng)稀釋再測(cè)定，注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2、樣品制備好后，立刻進(jìn)行測(cè)定，請(qǐng)勿將樣品進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的低溫保存，以免影響測(cè)定結(jié)果。

3、試劑四有一定的毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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2、常用試劑備貨充足，除對(duì)溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。

3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期，詳細(xì)情況請(qǐng)咨詢(xún)客服。

4、訂貨時(shí)間為工作日每周一至周五16:00之前。

5、如需代為檢測(cè)，標(biāo)本對(duì)環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專(zhuān)人取樣（限省內(nèi)客戶(hù)）。

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