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公司上萬種科研產(chǎn)品,主要供應(yīng)各大科研單位和學校,是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴把質(zhì)量關(guān),確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01S63802 |
注意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
PPO(EC
測定原理:
PPO能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌,后者在525nm有特征光吸收。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:20mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:5mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)或果汁樣本的處理:
按照血清(漿)或果汁體積(mL):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議取0.1mL血清(漿)或果汁加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至525nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定(在EP管中依次加入下列試劑)
PPO活性計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清(漿)或果汁PPO活性
單位的定義:每分鐘每mL血清(漿)或果汁在每mL反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化
0.01為一個酶活力單位。
PPO(U/mL)=ΔA×V反總÷(V液× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =60×ΔA÷V液
2、組織、細菌或細胞PPO活性
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位定義:每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個
酶活力單位。
PPO(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =60×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
(2)按樣本鮮重計算:
單位定義:每分鐘每g組織在每mL反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個
酶活力單位。
PPO(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =60×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位定義:每分鐘每1萬個細菌或細胞在每mL反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.01為一個酶活力單位。
PPO(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =0.12×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.3mL;V液:加入血清(漿)或果汁體積,0.1mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,10 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清(漿)或果汁PPO活性
單位的定義:每分鐘每mL血清(漿)或果汁在每mL反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化
0.005為一個酶活力單位。
PPO(U/mL)=ΔA×V反總÷(V液× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =120×ΔA÷V液
2、組織、細菌或細胞PPO活性
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位定義:每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.005為一個
酶活力單位。
PPO(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.005÷T =120×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
(2)按樣本鮮重計算:
單位定義:每分鐘每g組織在每mL反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.005為一個
酶活力單位。
PPO(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =120×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位定義:每分鐘每1萬個細菌或細胞在每mL反應(yīng)體系中使525nm處吸光值變化0.005為一個酶活力單位。
PPO(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T =0.24×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.3mL;V液:加入血清(漿)或果汁體積,0.1mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,10 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細胞或細菌總數(shù),500萬。
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原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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