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標(biāo)簽:β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase β-GC)試劑盒
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公司上萬種科研產(chǎn)品,主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校,是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān),確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase, β-GC)試劑盒 | 微量法 | 100管/48樣 | CS-01S63763 |
注意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
β-GC(EC
測定原理:
β-GC分解對-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算β-GC活性。
自備用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入12mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、培養(yǎng)液、血清(漿)等液體樣本:直接檢測。
測定步驟
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
β-GC活力計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL),y為吸光值。
(1)按液體體積計算:
單位的定義:每mL樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷V樣÷T
=56.98×(ΔA+0.0027)
(2)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
(3)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷W
(4)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.114×(ΔA +0.0027)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.3mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.03mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬;T:反應(yīng)時間,30min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL),y為吸光值。
(1)按液體體積計算:
單位的定義:每mL樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷V樣÷T
=85.47×(ΔA+0.0027)
(2)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
(3)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷W
(4)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.171×(ΔA +0.0027)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.3mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.03mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬;T:反應(yīng)時間,30min。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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2、常用試劑備貨充足,除對溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。
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