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標(biāo)簽:NADP磷酸酶（NADPase）試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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公司上萬(wàn)種科研產(chǎn)品，主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校，是國(guó)內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)，確保每一個(gè)出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格，讓您買(mǎi)的省心，用得放心。
| 產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| NADP磷酸酶（NADPase）試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01Ｓ63387 |
注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
NADPase主要存在于植物組織中，是生物體內(nèi)唯一催化NADP+降解為NAD+的酶，與NADK一起調(diào)控NAD和NADP之間的平衡。
測(cè)定原理：
NADPase能夠催化NADP+水解為NAD+和無(wú)機(jī)磷的反應(yīng)，通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)測(cè)定NADPase活性。
所需的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體15 mL×1瓶， 4℃保存。
試劑二：粉劑×4支，-20℃保存；用時(shí)加入1 mL試劑一充分溶解備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑三：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25mL蒸餾水，溶解后4℃可保存一周。
試劑四：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25mL蒸餾水，溶解后4℃可保存一周。
試劑五：液體 25mL×1 瓶，室溫保存。
試劑六：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。
0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑六20倍稀釋，即取 0.5mL試劑六加9.5蒸餾水，充分混勻。
定磷試劑的配制：按H2O: 試劑三:試劑四:試劑五=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑
應(yīng)為淺黃色，若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
樣本的前處理：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
操作步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)（在EP管中加入下列試劑）
注意事項(xiàng)：
1、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用試管要求嚴(yán)格，要沒(méi)有一點(diǎn)磷，若試管放過(guò)磷酸或磷酸鹽緩沖液，一定要洗得非常干凈，要先用洗潔精加水煮，再用自來(lái)水沖，最后用蒸餾水沖干凈。最好用一次性塑料管或新玻璃管，避免磷污染是檢測(cè)成敗的關(guān)鍵。
2、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管和對(duì)照管只要做一次即可。
NADPase酶活性計(jì)算：
1、按組織蛋白濃度計(jì)算：
定義：每小時(shí)每毫克組織蛋白NADPase分解NADP 產(chǎn)生1μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè) NADPase活力單位。
NADPase (μmol/h/mg prot)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V總)×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷
(V樣×Cpr)÷T=5×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
2、按樣本鮮重計(jì)算：
定義：每小時(shí)每g組織NADPase分解NADP 產(chǎn)生1μmol無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè) NADPase活力單位。
NADPase (μmol/h /g鮮重)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V總)×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×V總÷(W× V樣÷V樣總)÷T=5×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/mL；V總：酶促反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.04mL ；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5小時(shí)；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。
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原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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