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標(biāo)簽:亞硝酸還原酶(Nitrite reductase NiR)試劑盒
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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公司上萬(wàn)種科研產(chǎn)品,主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校,是國(guó)內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān),確保每一個(gè)出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格,讓您買(mǎi)的省心,用得放心。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
亞硝酸還原酶(Nitrite reductase,NiR)試劑盒 | 微量法 | 100T/48S | CS-01S63707 |
注意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
硝酸還原酶(NiR)是一類(lèi)能催化亞硝酸鹽還原的酶,廣泛存在于微生物及植物體內(nèi),是自然界氮循環(huán)過(guò)程中的關(guān)鍵酶,可以將亞硝酸鹽降解為NO或NH3,從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累,降低因亞硝酸鹽累積而造成的對(duì)生物體的毒害作用。
測(cè)定原理
亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO,使樣品中參與重氮化反應(yīng)生成紫紅色化合物的NO2—減少,即540nm處吸光值的變化可反映亞硝酸還原酶的活性。
需自備的儀器和用品
天平、研缽、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、低溫離心機(jī)。
試劑的組成和配制
提取液:液體112mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加5mL蒸餾水溶解。
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃保存。(如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解)
試劑四:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。(如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解)
試劑五:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
工作液:臨用前根據(jù)用量將試劑四和試劑五以1:1的比例混合。
酶液提取
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定操作表
計(jì)算公式
a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):y = 1.3594x + 0.0072,R2 = 0.9997;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y為吸光值(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)。
1.按照蛋白含量計(jì)算
酶活單位定義:每毫克組織蛋白每小時(shí)還原1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。
NiR(μmol/h /mg prot)= [A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管)-0.0072]÷1.3594×V標(biāo)÷(V樣×Cpr)÷T = 1.47×(A空白管-A測(cè)定管+A對(duì)照管-0.0072)÷Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義:每克組織每小時(shí)還原1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。
NiR(μmol/h/g 鮮重)=[A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管)-0.0072]÷1.3594×V標(biāo)÷(W ×V樣÷V樣總)÷T = 1.47×(A空白管-A測(cè)定管+A對(duì)照管-0.0072)÷W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活單位定義:每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)還原1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。
NiR(μmol/h /104 cell)= [A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管)-0.0072]÷1.3594×V標(biāo)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T = 1.47×(A空白管-A測(cè)定管+A對(duì)照管-0.0072)÷細(xì)胞數(shù)量
V標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)液體積,0.04mL;V樣:體系中加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1h; Cpr:樣本蛋白含量;W:樣本質(zhì)量,g
b. 使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):y = 0.6797x + 0.0072,R2 = 0.9997;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y為吸光值(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)。
1.按照蛋白含量計(jì)算
酶活單位定義:每毫克組織蛋白每小時(shí)還原1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。
NiR(μmol/h /mg prot)= [A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管)-0.0072]÷0.6797×V標(biāo)÷(V樣×Cpr)÷T = 2.94×(A空白管-A測(cè)定管+A對(duì)照管-0.0072)÷Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義:每克組織每小時(shí)還原1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。
NiR(μmol/h/g 鮮重)=[A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管)-0.0072]÷0.6797×V標(biāo)÷(W ×V樣÷V樣總)÷T = 2.94×(A空白管-A測(cè)定管+A對(duì)照管-0.0072)÷W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活單位定義:每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)還原1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位。
NiR(μmol/h /104 cell)= [A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管)-0.0072]÷0.6797×V標(biāo)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T = 2.94×(A空白管-A測(cè)定管+A對(duì)照管-0.0072)÷ 細(xì)胞數(shù)量
V標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)液體積,0.04mL;V樣:體系中加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1h; Cpr:樣本蛋白含量;W:樣本質(zhì)量,g
注意事項(xiàng)
1.配制好的工作液3天內(nèi)使用完。
2.若吸光值超過(guò)1.5,將上清液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤偌尤牍ぷ饕猴@色,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3.嚴(yán)格控制顯色時(shí)間,否則會(huì)對(duì)結(jié)果有影響。
4.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍為0.03μmol/mL-1.5μmol/mL。
5.A空白管-(A測(cè)定管-A對(duì)照管)線(xiàn)性范圍為0.02-1.5。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者:上海莼試生物技術(shù)有限公司
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