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標(biāo)簽:丙酮酸脫羧酶（PDC）活性測(cè)定試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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公司上萬(wàn)種科研產(chǎn)品，主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校，是國(guó)內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)，確保每一個(gè)出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格，讓您買(mǎi)的省心，用得放心。
| 產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 丙酮酸脫羧酶（PDC）活性測(cè)定試劑盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01Ｓ63683 |
注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
測(cè)定原理：
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來(lái)進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定340 nm光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算PDC活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體18mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體2.5mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1支，﹣20℃保存。
試劑五：液體30μL×1瓶，﹣20℃保存。
混合試劑：臨用前配制，將試劑四和試劑五轉(zhuǎn)移至試劑三中充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑六：液體2mL×1管，4℃保存。
粗酶液提。
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，工作3s，間歇10s，工作35次），16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織處理：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
PDC測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃水浴中預(yù)熱30min。
3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸餾水、20μL混合試劑、140μL試劑二和20μL試劑六，迅速混勻后于340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A1和A2。
4. 測(cè)定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、20μL混合試劑、140μL試劑二和20μL試劑六，迅速混勻后于340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A3和A4。
注意：空白管只需測(cè)定一次。
PDC活性計(jì)算：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(Cpr×V樣) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每克組織每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。
PDC (nmol/min /g 鮮重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(W×V樣÷V樣總) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。
PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按血清（漿）體積計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。PDC (nmol/min /mL) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷V樣÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL=2×10-4 L，V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02mL；V樣總：提取液體積，1 mL；Cpr：蛋白濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒；W ：樣品質(zhì)量； T：反應(yīng)時(shí)間，1 min。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(Cpr×V樣) ÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每克組織每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。
PDC (nmol/min /g 鮮重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(W×V樣÷V樣總) ÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。
PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按血清（漿）體積計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。PDC (nmol/min /mL) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷V樣÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5 cm；V總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL=2×10-4 L，V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02mL；V樣總：提取液體積，1 mL；Cpr：蛋白濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒；W ：樣品質(zhì)量； T：反應(yīng)時(shí)間，1 min。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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