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標(biāo)簽:過氧化物酶(Peroxidase POD)試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
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人增殖誘導(dǎo)配體酶聯(lián)免疫試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)
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公司上萬種科研產(chǎn)品，主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校，是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)，確保每一個(gè)出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格，讓您買的省心，用得放心。
| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 過氧化物酶(Peroxidase，POD)試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01Ｓ63672 |
注意：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
POD（EC
測定原理：
POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體100μL×1支，4℃保存；
試劑三：液體100μL×1支，4℃保存。
粗酶液提。
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至470nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：臨用前將試劑一、試劑二、試劑三按照2.6（mL）：1.5（μL）：1（μL）的比例混勻；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）預(yù)熱10min以上；現(xiàn)配現(xiàn)用。
3、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL工作液，混勻，記錄470nm下1min時(shí)吸光值A1和2min后的吸光值A2。計(jì)算ΔA＝A2-A1。
注意：
如果ΔA小于0.005，可將反應(yīng)時(shí)間延長到5min。如果ΔA大于0.5，可將樣本用提取液稀釋后測定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
POD活性計(jì)算：
用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）POD活性
單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
計(jì)算公式：
POD（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =2000×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =4×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
用96孔板測定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）POD活性
單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.005÷T =4000×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性
(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.005÷T =4000×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =4000×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個(gè)酶活力單位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T =8×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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