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標(biāo)簽:琥珀酸脫氫酶（Succinate Dehydrogenase SDH）試劑盒
聯(lián)系人:高小姐
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詳細(xì)地址：上海嘉定區(qū)嘉羅公路1661
公司上萬種科研產(chǎn)品，主要供應(yīng)各大科研單位和學(xué)校，是國內(nèi)眾多科研單位的供應(yīng)商。公司嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)，確保每一個出廠產(chǎn)品質(zhì)量合格，讓您買的省心，用得放心。
| 產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 琥珀酸脫氫酶（Succinate Dehydrogenase，SDH）試劑盒 | 微量法 | 100管/96樣 | CS-01Ｓ63639 |
注意：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
SDH（EC
測定原理
SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm處具有特征吸收峰，通過600nm吸光度的變化，測定2．6-DPIP的還原速度，代表SDH酶活性。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：20mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：1.5mL×1支，-20℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；
樣本的前處理
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g，4℃離心5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的SDH（此步可選做）。
5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于線粒體SDH活性測定。
測定步驟和加樣表
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至600nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1）在試劑四中加入18mL蒸餾水充分溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
（2）在試劑五中加入1mL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑五和180μL試劑四，混勻，立即記錄600nm處20s時的吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
SDH活性的計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=952×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=192×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.385×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1904×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=384×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.77×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2.1×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司
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